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Herstellung und Charakterisierung von Antikörpern gegen Triacetontriperoxid (TATP)

  • Die vorliegende Arbeit beschreibt die Herstellung und Charakterisierung der ers-ten Antikörper gegen Triacetontriperoxid (TATP), einem hoch empfindlichen und unkonventionellen (nicht-kommerziellen) Initialsprengstoff. Entscheidend dafür war die Synthese eines TATP-imitierenden Haptens, welches die typische nona-gonale Struktur des TATP mit seinen drei Peroxid- und sechs Methylgruppen nahezu perfekt nachbildet, aber den Vorzug einer zusätzlichen Carboxygruppe zur kovalenten Kopplung an Proteine aufweist. Dadurch konnte das TATP-Hapten an Rinderserumalbumin (BSA) gebunden werden, um ein immunogenes Konjugat zu erzeugen, welches die erfolgreiche Immunisierung zweier Säuge-tierarten, Maus und Kaninchen, ermöglichte. Der Verlauf der In-vivo-Immunisierungen wurde durch die Analyse der Tier-seren in regelmäßigen Abständen mittels enzymgekoppeltem Immunoassay (ELISA) verfolgt. Die polyklonalen Antikörper beider Spezies waren ungewöhnlich selektiv gegenüber TATP. Jedoch unterschied sich dieDie vorliegende Arbeit beschreibt die Herstellung und Charakterisierung der ers-ten Antikörper gegen Triacetontriperoxid (TATP), einem hoch empfindlichen und unkonventionellen (nicht-kommerziellen) Initialsprengstoff. Entscheidend dafür war die Synthese eines TATP-imitierenden Haptens, welches die typische nona-gonale Struktur des TATP mit seinen drei Peroxid- und sechs Methylgruppen nahezu perfekt nachbildet, aber den Vorzug einer zusätzlichen Carboxygruppe zur kovalenten Kopplung an Proteine aufweist. Dadurch konnte das TATP-Hapten an Rinderserumalbumin (BSA) gebunden werden, um ein immunogenes Konjugat zu erzeugen, welches die erfolgreiche Immunisierung zweier Säuge-tierarten, Maus und Kaninchen, ermöglichte. Der Verlauf der In-vivo-Immunisierungen wurde durch die Analyse der Tier-seren in regelmäßigen Abständen mittels enzymgekoppeltem Immunoassay (ELISA) verfolgt. Die polyklonalen Antikörper beider Spezies waren ungewöhnlich selektiv gegenüber TATP. Jedoch unterschied sich die Affinität der Antikörper der zwei Spezies um das 5 000-fache, wobei die Kaninchenseren den Mausseren überlegen waren. Entsprechend war auch die mit Kaninchenserum erreichbare TATP-Nachweisgrenze von 0.01 μg L-1 deutlich besser im Vergleich zu 50 μg L-1, die mit Mausserum erzielt wurden. Der Messbereich des TATP-ELISA mit Kanin-chenserum deckte zudem mehr als vier Zehnerpotenzen ab, wie mittels Präzisi-onsprofil bestimmt wurde. Die erhaltenen TATP-Antikörper aus Kaninchen stehen damit Anwendungen in Nachweissystemen für die sehr empfindliche Detektion von TATP zur Verfügung, die u. a. in sicherheitsrelevanten Bereichen zum Einsatz kommen könnten. Als erste Anwendung wurde ein TATP-ELISA realisiert, der im Rahmen dieser Arbeit ausführlich optimiert wurde. Außerdem wurden erste Schritte zur Entwicklung eines TATP-Schnelltests (LFA) unternommen. Weitere Biosensoren auf Grundla-ge der neu entwickelten TATP-Antikörper sind denkbar.zeige mehrzeige weniger

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Autor*innen:Astrid Walter
Dokumenttyp:Dissertation
Veröffentlichungsform:Graue Literatur
Sprache:Deutsch
Jahr der Erstveröffentlichung:2014
Herausgeber (Institution):Humboldt-Universität zu Berlin
Titel verleihende Institution:Humboldt-Universität zu Berlin, Mathematisch-Naturwissenschaftliche Fakultät I
Verlagsort:Berlin
Erste Seite:1
Letzte Seite:181
Freie Schlagwörter:APEX; Acetone peroxide; Acetonperoxid; Antibody; Biosensor development; Biosensorentwicklung; ELISA; HME; Hapten design; Hapten immunoassay; Hapten-Design; Hapten-Immunoassay; Immunisierung; Immunization; Immunoassay; Kaninchen-Immunisierung; Maus-Immunisierung; Mouse immunization; Organic peroxides; Organische Peroxide; Peroxid-basierte Explosivstoffe; Peroxide based explosives; Rabbit immunization; TATP; Terrorism; Terrorismus; Triacetone triperoxide; Triacetontriperoxid
Verfügbarkeit des Dokuments:Datei im Netzwerk der BAM verfügbar ("Closed Access")
Datum der Freischaltung:20.02.2016
Jahr der Fertigstellung:2014
Referierte Publikation:Nein
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