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Organisationseinheit der BAM
Under the auspices of the Protein Analysis Working Group (PAWG) of the Comité Consultatif pour la Quantité de Matière (CCQM) a pilot study, CCQM-P216, was coordinated by the Chinese National Institute of Metrology (NIM), National Research Council of Canada (NRC) and the Bureau International des Poids et Mesures (BIPM). Eleven Metrology Institutes or Designated Institutes and the BIPM participated in the first phase of the pilot study (Part 1). The purpose of this pilot study was to develop measurement capabilities for larger proteins using a recombinant humanized IgG monoclonal antibody against Spike glycoprotein of SARS-CoV-2 (Anti-S IgG mAb) in solution. The first phase of the study was designed to employ established methods that had been previously studies by the CCQM Protein Analysis Working Group, involving the digestion of protein down to the peptide or amino acid level. The global coronavirus pandemic has also led to increased focus on antibody quantitation methods. IgG are among the immunoglobulins produced by the immune system to provide protection against SARS-CoV-2. Anti-SARS-CoV-2 IgG can therefore be detected in samples from affected patients. Antibody tests can show whether a person has been exposed to the SARS-CoV-2, and whether or not they potentially show lasting immunity to the disease. With the constant spread of the virus and the high pressure of re-opening economies, antibody testing plays a critical role in the fight against COVID-19 by helping healthcare professionals to identify individuals who have developed an immune response, either via vaccination or exposure to the virus. Many countries have launched large-scale antibody testing for COVID-19. The development of measurement standards for the antibody detection of SARS-CoV-2 is critically important to deal with the challenges of the COVID-19 pandemic. In this study, the SARS-CoV-2 monoclonal antibody is being used as a model system to build capacity in methods that can be used in antibody quantification. Amino acid reference values with corresponding expanded uncertainty of 36.10 ± 1.55 mg/kg, 38.75 ± 1.45 mg/kg, 18.46 ± 0.78 mg/kg, 16.20 ± 0.67 mg/kg and 30.61 ± 1.30 mg/kg have been established for leucine, valine, phenylalanine, isoleucine and proline, respectively. Agreement between nearly all laboratories was achieved for the amino acid analysis within 2 to 2.5 %, with one participant achieving markedly higher results due to a technical issue found in their procedure; this result was thus excluded from the reference value calculations. The relatively good agreement within a laboratory between different amino acids was not dissimilar to previous results for peptides or small proteins, indicating that factors such as hydrolysis conditions and calibration procedures could be the largest sources of variability. Peptide reference values with corresponding expanded uncertainty of 4.99 ± 0.28 mg/kg and 6.83 ± 0.65 mg/kg have been established for ALPAPIEK and GPSVFPLAPSSK, respectively. Not surprisingly due to prior knowledge from previous studies on peptide quantitation, agreement between laboratories for the peptide-based analysis was slightly poorer at 3 to 5 %, with one laboratory's result excluded for the peptide GPSVFPLAPSSK. Again, this level of agreement was not significantly poorer than that achieved in previous studies with smaller or less complex proteins. To reach the main text of this paper, click on Final Report.
Hintergrund und Ziel. Kühlschmierstoffe auf der Basis von Fettsäureestern bieten technologische Vorteile gegenüber mineralölbasierten Produkten. Außerdem sind sie umweltgerechter und leisten einen Beitrag zum nachhaltigen Wirtschaften. Dennoch werden sie in der Praxis kaum eingesetzt, da sie bisher aufgrund von Rohstoffpreisen und Synthesekosten teurer sind, als konventionelle Konkurrenzprodukte. Alternativen hinsichtlich Rohstoffen und Synthesewegen werden betrachtet und die Eigenschaftsbilder resultierender Esterprodukte miteinander verglichen.
Methoden. In die Untersuchungen wurden drei auf enzymatischkatalytischem Weg hergestellte Fettsäure-2-Ethylhexylester auf der Basis von Erdnussfett, Rindertalg und Altspeisefett sowie vier konventionell synthetisierte Ester aus Tier- bzw. Pflanzenfetten und 2-Ethyl-1-Hexanol einbezogen. Bestimmt wurden physikalische Eigenschaftswerte, Fettsäurespektren, Gehalte an freien Fettsäuren sowie Oxidations- und Hydrolysestabilitäten. Ferner wurden Thermolyseexperimente durchgeführt.
Ergebnisse. Die physikalischen Eigenschaften der sieben Ester, d.h. Dichte, Viskosität, Pourpoint und Flammpunkt, waren vergleichbar und ließen die Anwendbarkeit der Produkte als Basisöle für Kühlschmierstoffe erwarten. Hydrolysebeständigkeiten waren hoch und thermische Belastungen der Ester gaben keine Hinweise auf besondere Schadstoffbildungspotentiale. Defizite wiesen insbesondere die enzymatisch hergestellten Ester hinsichtlich Oxidationsstabilitäten und den Gehalten an freien Fettsäuren auf.
Ausblick. Für die Praxis wird es notwendig sein, Mindestqualitäten für Rohstoffe und resultierende Esteröle zu definieren, die als Grundöle im Kühlschmierstoffbereich eingesetzt werden sollen. Außerdem müssen Verfahren ausgearbeitet werden, die es ermöglichen, zu qualitativ hochwertigen Esterprodukten zu gelangen, ohne den Preisvorteil von Rohstoffen wie Altspeise- und Tierfetten durch hohe Produktions- und Veredelungskosten zu verlieren. Ein Beitrag hierzu ist sicherlich die Weiterentwicklung der wenig energieaufwändigen enzymatischen Alkoholyse zur Esterproduktion.
Im Rahmen eines von der Kulturstiftung des Bundes und der Kulturstiftung der Länder geförderten
Projektes zum Erhalt naturkundlicher Nasssammlungen wurden 1) der Zustand der Sammlungen bewertet
(Profiling; Analyse der Vergällungsmittel), 2) über Workshops Expertenwissen in das Projekt gebracht,
3) neue archivbeständige Materialien und Managementmaßnahmen eingeführt (Borosilikat-Gläser und -
Röhrchen, Augenwatte, Tefloneinlagen, Japanpapier, archivbeständige Kleber und Papier, Etikettenaufbewahrung;
digitales Dichtemessgerät, Alcomon-Indikator, Kontrollintervalle), 4) Erhaltungsmaßnahmen
zur langfristigen Konservierung in großem Umfange durchgeführt (Messen der Alkoholkonzentration,
Umsetzen von Präparaten in geeignetere Gefäße, Wiederverschluss von Schaugläsern) und 5) Erfahrungen
und Diskussionsergebnisse zusammengestellt, nicht ohne auf Wissenslücken und wünschenswerte
Forschungsaspekte hinzuweisen. Das Projekt profitierte besonders von der Expertise aus den Materialwissenschaften
und der Papierrestaurierung. Das Museum für Naturkunde Berlin kooperierte eng mit
dem Berliner Medizinhistorischen Museum der Charité, der Zoologischen Staatssammlung München und
dem Forschungsinstitut Senckenberg in Frankfurt. Letzteres Museum führte ein eigenes, themenverwandtes
KUR-Projekt Restauration der Sammlungen 'Vergleichende Anatomie, Embryologie und Histologie'
des Naturmuseums Senckenberg durch.
Antibodies armed with photosensitizers: from chemical synthesis to photobiological applications
(2015)
Targeting photosensitizers to cancer cells by conjugating them with specific antibodies, able to recognize and bind to tumor-associated antigens, is today one of the most attractive strategies in photodynamic therapy (PDT). This comprehensive review updates on chemical routes available for the preparation of photo-immunoconjugates (PICs), which show dual chemical and biological functionalities: photo-properties of the photosensitizer and the immunoreactivity of the antibody. Moreover, photobiological results obtained with such photo-immunoconjugates using in vitro and in vivo cancer models are also discussed.
The synthesis of a novel PS conjugated with bovine and human serum albumin (BSA and HSA) and a monoclonal antibody anti-CD104 is reported, as well as their biological potential against the human bladder cancer cell line UM-UC-3. No photodynamic effect was detected when the non-conjugated porphyrin was used. Yet, when it was coupled covalently with the mAb anti-CD104, BSA and HSA, the resulting photosensitizer conjugates demonstrated high efficacy in destroying the cancer cells, the mAb anti-CD104 efficacy overruling the albumins.