@misc{RadkeLubitzGieseetal.2012, author = {Radke, Lars and Lubitz, Annika and Giese, Christoph and Frohme, Marcus}, title = {Einfluss der Kryokonservierung auf die Immunantwort von Leukozyten}, series = {Wissenschaftliche Beitr{\"a}ge 2012}, volume = {16}, journal = {Wissenschaftliche Beitr{\"a}ge 2012}, issn = {0949-8214}, doi = {10.15771/0949-8214_2012_1_1}, url = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:kobv:526-opus-1363}, pages = {9 -- 14}, year = {2012}, abstract = {Die Messung von Zytokinen in Stimulationsexperimenten zur Bestimmung von St{\"a}rke und Umfang einer Immunreaktion werden in der Praxis h{\"a}ufig an kryokonserviertem Zellmaterial durchgef{\"u}hrt. Bisherige Untersuchungen zum Einfluss der Kryokonservierung auf die Zytokinexpression sind widerspr{\"u}chlich. In den hier durchgef{\"u}hrten Experimenten wurden die Genexpression und/ oder Sekretion der Zytokine IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12, IL-13, GM-CSF, IFN-γ und TNF-α in frisch isolierten und kryokonservierten Immunzellen aus Blut (PBMC) eines gesunden Spenders bestimmt. Diese wurden mit den Immunsystem-aktivierenden Stoffen OKT-3 und Concanavalin A (Con A) stimuliert und f{\"u}r 4 bzw. 24 h kultiviert. Ein Vergleich der frisch-isolierten und kryokonservierten PBMC in Stimulationsexperimenten zeigt, (1) dass die Messung der Genexpression genauere Einblicke zu Beginn der einsetzenden Immunreaktion verschafft, als die Messung der ausgesch{\"u}tteten Zytokine, (2) dass durch Einfrieren die Immunreaktion insbesondere zu diesem Zeitpunkt beeinflusst wird und (3) dass zu sp{\"a}teren Zeitpunkten die Konzentrationsbestimmung der Zytokine im Zellkultur{\"u}berstand das Mittel der Wahl ist.}, language = {de} } @misc{KeilRadkeTillichetal.2015, author = {Keil, Karolin and Radke, Lars and Tillich, Ulrich M. and Frohme, Marcus}, title = {Automatisierung des Bio-Plex Pro Analyseverfahrens}, series = {Wissenschaftliche Beitr{\"a}ge 2015}, volume = {19}, journal = {Wissenschaftliche Beitr{\"a}ge 2015}, issn = {0949-8214}, doi = {10.15771/0949-8214_2015_1_2}, url = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:kobv:526-opus4-3524}, pages = {15 -- 19}, year = {2015}, abstract = {F{\"u}r den simultanen Nachweis mehrerer Analyten innerhalb einer Probe ist die Bead-basierte Multiplexanalytik ein h{\"a}ufig verwendetes Verfahren und wird beispielsweise zur Quantifizierung von Proteinen genutzt. Die aufwendige Durchf{\"u}hrung der Assays soll durch Automatisierung einerseits dem Anwender abgenommen werden, w{\"a}hrend andererseits die Genauigkeit und Reproduzierbarkeit der Analyse gesteigert wird. Die Automatisierung des Bio-Plex Pro™ Assays ist mit dem Pipettierroboter Tecan Freedom EVO 200 umgesetzt worden. Es ist ein Skript mit der Software Freedom EVOware® entwickelt worden, welches die Probenvorbereitung des Assays vollst{\"a}ndig {\"u}bernimmt. F{\"u}r einen Vergleich der manuellen und automatisierten Methode sind die humanen Zytokine IL-2, IL-4, IL-10, GM-CSF, IFN-γ und TNF-α in einer achtstufigen Standardverd{\"u}nnungsreihe und in unterschiedlich konzentrierten Proben gemessen worden. Die Berechnung der Streuungen (Standardabweichung und Variationskoeffizient) der einzelnen Standardverd{\"u}nnungsreihen sowie der Vergleich von gemessenen und erwarteten Konzentrationen der automatisierten und manuellen Methode zeigen, dass die Automatisierung neben der zeitlichen Optimierung auch die Genauigkeit und Reproduzierbarkeit der Analyse verbessert.}, language = {de} } @misc{RadkeLopezHemmerlingLubitzetal.2010, author = {Radke, Lars and L{\´o}pez-Hemmerling, Diana and Lubitz, Annika and Giese, Christoph and Wildenauer, Franz-Xaver and Frohme, Marcus}, title = {Etablierung verschiedener Bead-basierter Multiplexmethoden mit einem Suspensions Array-System f{\"u}r molekulardiagnostische Zwecke}, series = {Wissenschaftliche Beitr{\"a}ge 2009/2010}, volume = {14}, journal = {Wissenschaftliche Beitr{\"a}ge 2009/2010}, issn = {0949-8214}, doi = {10.15771/0949-8214_2010_1_1}, url = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:kobv:526-opus-802}, pages = {6 -- 12}, year = {2010}, abstract = {Die simultane Bestimmung mehrerer Analyten und die Erstellung komplexer Parameterprofile erlangt immer gr{\"o}ßere Bedeutung in der heutigen Labordiagnostik. Die Bead-basierte Multiplexanalytik bietet hier eine flexible, schnelle und einfache Methode zur Erstellung individueller Analysen. Aufgrund der Vielzahl von Anwendungsm{\"o}glichkeiten, die diese moderne Nachweismethode im Bereich molekularbiologischer Fragestellungen bietet, ist die Etablierung der Beadbasierten Multiplexanalytik im Labor f{\"u}r Molekularbiologie und funktionelle Genomik der Technischen Hochschule Wildau von großem Nutzen. Zur Einarbeitung in das Testsystem wurden die Konzentrationen der Zytokine IL-2, IL-4, IFN-γ und TNF-α in Zellkultur{\"u}berst{\"a}nden mit kommerziellen Fertigsystemen gemessen und mit mRNA-Expressionsraten der gleichen Proben verglichen. Des Weiteren wurde ein Testsystem zum Nachweis von humanen Antik{\"o}rpern der Klassen IgG und IgM sowie deren antigen-spezifischer Anteil in Zellkultur{\"u}berst{\"a}nden entwickelt. Außerdem konnte durch die erfolgreiche Detektion von DNA-gekoppelten Beads mittels markierter Oligonukleotidsequenz die Kopplung und die Anwendbarkeit der Methode auf Bindungsexperimente mit Nukleotidsequenzen gezeigt werden.}, language = {de} } @misc{GossingRadkeFrohmeetal.2016, author = {Gossing, Wilhelm and Radke, Lars and Frohme, Marcus and Biering, Henrik}, title = {ECS-Komplex - ein neuer Biomarker bei Wachstumshormonst{\"o}rungen?}, series = {Wissenschaftliche Beitr{\"a}ge 2016}, volume = {20}, journal = {Wissenschaftliche Beitr{\"a}ge 2016}, issn = {0949-8214}, doi = {10.15771/0949-8214_2016_1_3}, url = {http://nbn-resolving.de/urn:nbn:de:kobv:526-opus4-5308}, pages = {23 -- 29}, year = {2016}, abstract = {St{\"o}rungen im Metabolismus des Wachstumshormons k{\"o}nnen sich als Wachstumshormonmangel oder -{\"u}berschuss (Akromegalie) {\"a}ußern. In beiden F{\"a}llen handelt es sich um seltene Krankheiten, die aufwendig behandelt werden m{\"u}ssen, da jeder Patient anders auf seine jeweilige Medikation anspricht. Zur Bestimmung des individuellen Ansprechverhaltens auf die medikament{\"o}se Behandlung wird Insulin-like Growth Factor 1 verwendet, das jedoch als unzuverl{\"a}ssig f{\"u}r die Therapiekontrolle gilt. Um die Diagnostik und Therapie von Wachstumshormonst{\"o}rungen zu verbessern, wurde in dieser Pilotstudie der Nutzen des neuen potenziellen Biomarkers Elongin B/C-Cullin5-Socs-box Komplex (ECS-Komplex) {\"u}berpr{\"u}ft. Die f{\"u}nf Proteine des Komplexes {\"u}ben zusammen einen negativen Feedback-Mechanismus auf den Wachstumshormonrezeptor aus und regulieren ihn in Abh{\"a}ngigkeit vom Wachstumshormonspiegel im Blut. F{\"u}r diese Pilotstudie wurden vier Patienten mit Wachstumshormondefizienz und 15 Patienten mit Akromegalie rekrutiert. Die Messung von Unterschieden in der Expression der Gene auf RNA-Ebene in Blutproben der Patienten erlaubt erste Aussagen {\"u}ber deren Eignung als therapeutische Marker f{\"u}r diese Krankheiten.}, language = {de} }