TY - THES A1 - Wens, Jasmin T1 - Transport von fluoreszierenden Proteinen mittels dreischaligen Calciumphosphat-Nanopartikeln in eukaryotische Zellen N2 - Für die Transfektionsexperimente mit Calciumphoshat-Nanopartikel wurden erfolgreich die Proteine exprimiert, gereinigt und durch eine SDS-PAGE überprüft. Die benötigten Plasmide wurden ebenfalls hergestellt und erfolgreich mit einer Testrestriktion überprüft. Calciumphosphat-Nanopartikel wurden durch Präzipitation der Calcium- und Phosphat-Lösungen synthetisiert, mit Proteinen (Tandem, mRFP1, eGFP) und deren entsprechenden DNA beladen und in HeLa-Zellen transfiziert. Fast die gesamte eingesetzte Menge der Proteine und Dreiviertel der eingesetzten DNA wurden nach der Synthese auf den Partikeln detektiert. Die Partikel waren durchschnittlich 100 nm groß, überwiegend monodispers, sphärisch und durch die Funktionalisierung mit dem Polymer (PEI) positiv geladen. Die Calciumphosphat-Nanopartikel waren im Allgemeinen nicht toxisch, allerdings verringerte sich die Viabilität der Zellen bei Erhöhung der Partikelkonzentration und längerer Inkubationsdauer. Beim Einsatz der Partikelkonzentration, die für die Transfektionsexperimente verwendet wurden, ergab sich keine bedeutende Toxizität im Vergleich zur Verwendung von Lipofectamin mit Biomolekülen. Die Transfektion, der mit DNA- und Proteinen-beladenen Calciumphosphat- Nanopartikeln in HeLa-Zellen, konnte mit Fluoreszenz- und Konfokalmikroskopie bestätigt werden. Die Proteine sind punktuell in den Zellen erkennbar und die bestimmte Transfektionseffizienz deutet auf einen Abbau der Proteine im Laufe der Zeit. Die DNA hingegen, musste zunächst zum fluoreszierenden Protein umgesetzt werden und verbreitete sich anschließend cytosolisch in der Zelle. Durch den Fluoreszenzverlust des eGFP im sauren Millieu, welches mit einem in vitro Fluoreszenztest bewiesen wurde, konnte mit einer konfokalmikroskopischer Untersuchung der transfizierten Zellen eine Lokalisation der Protein-Partikel in den Lysosomen festgestellt werden. Lipofectamin ist ein effizientes Transportreagenz für Nukleinsäuren, allerdings können dadurch keine Proteine in die Zellen transportiert werden. Y1 - 2018 ER -