@masterthesis{Wens, type = {Bachelor Thesis}, author = {Wens, Jasmin}, title = {Transport von fluoreszierenden Proteinen mittels dreischaligen Calciumphosphat-Nanopartikeln in eukaryotische Zellen}, school = {Hochschule Rhein-Waal}, abstract = {F{\"u}r die Transfektionsexperimente mit Calciumphoshat-Nanopartikel wurden erfolgreich die Proteine exprimiert, gereinigt und durch eine SDS-PAGE {\"u}berpr{\"u}ft. Die ben{\"o}tigten Plasmide wurden ebenfalls hergestellt und erfolgreich mit einer Testrestriktion {\"u}berpr{\"u}ft. Calciumphosphat-Nanopartikel wurden durch Pr{\"a}zipitation der Calcium- und Phosphat-L{\"o}sungen synthetisiert, mit Proteinen (Tandem, mRFP1, eGFP) und deren entsprechenden DNA beladen und in HeLa-Zellen transfiziert. Fast die gesamte eingesetzte Menge der Proteine und Dreiviertel der eingesetzten DNA wurden nach der Synthese auf den Partikeln detektiert. Die Partikel waren durchschnittlich 100 nm groß, {\"u}berwiegend monodispers, sph{\"a}risch und durch die Funktionalisierung mit dem Polymer (PEI) positiv geladen. Die Calciumphosphat-Nanopartikel waren im Allgemeinen nicht toxisch, allerdings verringerte sich die Viabilit{\"a}t der Zellen bei Erh{\"o}hung der Partikelkonzentration und l{\"a}ngerer Inkubationsdauer. Beim Einsatz der Partikelkonzentration, die f{\"u}r die Transfektionsexperimente verwendet wurden, ergab sich keine bedeutende Toxizit{\"a}t im Vergleich zur Verwendung von Lipofectamin mit Biomolek{\"u}len. Die Transfektion, der mit DNA- und Proteinen-beladenen Calciumphosphat- Nanopartikeln in HeLa-Zellen, konnte mit Fluoreszenz- und Konfokalmikroskopie best{\"a}tigt werden. Die Proteine sind punktuell in den Zellen erkennbar und die bestimmte Transfektionseffizienz deutet auf einen Abbau der Proteine im Laufe der Zeit. Die DNA hingegen, musste zun{\"a}chst zum fluoreszierenden Protein umgesetzt werden und verbreitete sich anschließend cytosolisch in der Zelle. Durch den Fluoreszenzverlust des eGFP im sauren Millieu, welches mit einem in vitro Fluoreszenztest bewiesen wurde, konnte mit einer konfokalmikroskopischer Untersuchung der transfizierten Zellen eine Lokalisation der Protein-Partikel in den Lysosomen festgestellt werden. Lipofectamin ist ein effizientes Transportreagenz f{\"u}r Nukleins{\"a}uren, allerdings k{\"o}nnen dadurch keine Proteine in die Zellen transportiert werden.}, language = {de} }