Analyse der regulatorischen T-Zellen in Monozytapheresen gesunder Blutspender

Language
de
Document Type
Doctoral Thesis
Issue Date
2014-02-11
Issue Year
2014
Authors
Bochskanl, Wennemar
Editor
Abstract

Seit einigen Jahren wird die Gewinnung von Monozyten durch Leukozytapherese intensiv erforscht, um die Anzüchtung dendritischer Zellen zu optimieren. Sie dienen als Grundlage für die Herstellung von Tumorvakzinen. Dabei wurde den T-Zell-Populationen bisher wenig Beachtung geschenkt, sodass derzeit nur wenige Daten über den Gehalt und die Zusammensetzung von T-Zell-Populationen in Leukozytapheresaten, die für DLI (Donor Leukocyte Infusion) benutzt werden, vorliegen. Insbesondere die CD3+ CD4+ CD25+ CD127low regulatorischen T-Zellen (Treg) sind in den letzten Jahren zur Entwicklung neuartiger Therapiekonzepte in den Fokus medizinischer Forschung gerückt. Ihre Quantifizierung im Rahmen von Monozytapheresen steht daher im Mittelpunkt dieser Arbeit. Von 31 Monozytapheresen wurden den Spendern vor und nach der Separation sowie dem Konzentrat Blutproben entnommen und auf verschiedene Populationen und Parameter untersucht. Dazu wurden die Spender und der Ertrag der Leukozytapheresen hinsichtlich „Spenderalter“, „Buffy-coat-Volumen“ und „totales Blutvolumen“ verglichen. Die Blutbildkontrolle erfolgte mithilfe eines Blutbildautomaten, die T-Zell-Populationen wurden durchflusszytometrisch bestimmt. Die statistische Auswertung erfolgte mit PASW 18.0 für Windows. Ältere Spender zeigten signifikant höhere Anteile der aktivierten Helferzellen (CD25+) und der CD25+ Helferzellen. Auch zeigten ältere Spender höhere T-Zell-Erträge (nicht signifikant) und einen signifikant höheren Ertrag der CD14+ Zellen. Die Spendergruppe mit dem größeren Buffy-coat-Volumen zeigte ein signifikant größeres Produktvolumen sowie einen höheren Ertrag und eine signifikant höhere Sammeleffizienz für Thrombozyten. Ebenso waren die Recruitmentfaktoren für CD25+ T-Zellen und aktivierte Helferzellen, der Treg-Ertrag und die Sammeleffizienzen für CD25+ T-Zellen, aktivierte Helferzellen und Tregs bei dieser Spendergruppe größer. Auf die prozentuale Verteilung der T-Zell-Populationen schien die Menge des Buffy-coat-Volumens offenbar keinen Einfluss zu haben. Beim Vergleich der totalen Blutvolumina zeigten sich bei der Spendergruppe mit dem größeren TBV größere Recruitmentfaktoren und geringere Zellverluste sowie größere Zellerträge und Sammeleffizienzen bezüglich CD25+ T-Zellen, aktivierter Helferzellen und Tregs. Größere Buffy-coat-Volumina führen zu einem größeren Produktvolumen und einer stärkeren Verunreinigung des Produkts mit Thrombozyten. Das auto MNC-Programm des COM.TEC-Zellseparators ist zur Sammlung von T-Zellen gut geeignet, wobei besonders die Population der regulatorischen T-Zellen während der Leukozytapherese abfällt. Hohe Treg-Erträge können mit älteren Spendern sowie mit Spendern mit größerem TBV und BC-Volumen erzielt werden. Ferner ist das autoMNC-Programm gut zur Sammlung von CD14+ Monozyten geeignet, wenngleich die Konstanz der Sammelergebnisse verbesserungsbedürftig ist. Es bietet eine hohe Spendersicherheit, da nur wenige milde Zitratreaktionen auftraten.

DOI
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