Eine Positivkontrolle aus drei viralen Antigenen zur Funktionalitätsüberprüfung humaner CD4+ T-Zellen

Language
de
Document Type
Doctoral Thesis
Issue Date
2020-02-17
Issue Year
2020
Authors
Schiller, Annemarie
Editor
Abstract

Testing of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) for immune monitoring purposesrequires verification of their functionality. This is of particular concern when the PBMC have beenshipped or stored for prolonged periods of time. While the CEF (Cytomegalo-, Epstein-Barr andFlu-virus) peptide pool has become the gold standard for testing CD8 cell functionality, a positivecontrol for CD4 cells is so far lacking. The latter ideally consists of proteins so as to control for thefunctionality of the antigen processing and presentation compartments, as well. Aiming to generate apositive control for CD4 cells, we first selected 12 protein antigens from infectious/environmentalorganisms that are ubiquitous: Varicella, Influenza, Parainfluenza, Mumps, Cytomegalovirus,Streptococcus,Mycoplasma,Lactobacillus,Neisseria,Candida, Rubella, and Measles. Of these antigens,three were found to elicited interferon (IFN)-γ-producing CD4 cells in the majority of human testsubjects: inactivated cytomegalo-, parainfluenza-, and influenza virions (CPI). While individuallynone of these three antigens triggered a recall response in all donors, the pool of the three (the ‘CPIpool’), did. One hundred percent of 245 human donors tested were found to be CPI positive, includingCaucasians, Asians, and African-Americans. Therefore, the CPI pool appears to be suitable to serveas universal positive control for verifying the functionality of CD4 and of antigen presenting cells.

Abstract

Wenn im Bereich der immunologischen Grundlagenforschung Vollblutproben oder bereits aufgetrennte mononukleäre Zellen des peripheren Bluts (kurz: PBMC) getestet werden, muss im Vorfeld ihre Funktionalität sichergestellt werden. Hierzu werden Positivkontrollen eingesetzt, die zur Überprüfung der Qualität der einzelnen Zellen dienen. Für die CD8+ T-Zellen gibt es den CEF-Peptidpool, welcher spezifische Epitope des Zytomegalie- (CMV), Epstein-Barr- (EBV) und Influenzavirus enthält. Für eine gezielte Überprüfung der CD4+ T-Zellen auf ihre Funktionalität hin, zum Beispiel nach Kryokonservierung und Transport, fehlte bisher diese Positivkontrolle. Wir haben daraufhin in unserem Forschungsprojekt verschiedene Antigene getestet, die die Anforderung für eine suffiziente Positivkontrolle für CD4+ T-Zellen erfüllen. Diese überprüft idealerweise auch die Funktionalität der Antigen prozessierenden und präsentierenden Zellen.
Wir haben hierzu 12 ubiquitär vorkommende Antigene getestet: Varicella, Influenza, Parainfluenza, Mumps, Cytomegalievirus, Rubella, Masernvirus, Streptococcus salivarius, Lactobacillus bulgaricus, Neisseria gonorrhea und Candida albicans. Die inaktivierten Virionen des Cytomegalie-, Parainfluenza- und Influenzavirus haben bei der Mehrzahl an getesteten Spendern eine Interferon (IFN)-g-Sekretion der stimulierten CD4+ T-Zellen hervorgerufen. Während ein einzelnes Antigen nicht ausreichte, konnte ein Pool der drei Antigene (kurz: ,CPI-Pool') bei jedem der 254 Spendern eine positive Reaktion hervorrufen.

DOI
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