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A modern day light microscope has evolved from a tool devoted to making primarily empirical observations to what is now a sophisticated, quantitative device that is an integral part of both physical and life science research. Nowadays, microscopes are found in nearly every experimental laboratory. However, despite their prevalent use in capturing and quantifying scientific phenomena, neither a thorough understanding of the principles underlying quantitative imaging techniques nor appropriate knowledge of how to calibrate, operate and maintain microscopes can be taken for granted. This is clearly demonstrated by the well-documented and widespread difficulties that are routinely encountered in evaluating acquired data and reproducing scientific experiments. Indeed, studies have shown that more than 70% of researchers have tried and failed to repeat another scientist’s experiments, while more than half have even failed to reproduce their own experiments1. One factor behind the reproducibility crisis of experiments published in scientific journals is the frequent underreporting of imaging methods caused by a lack of awareness and/or a lack of knowledge of the applied technique2,3. Whereas quality control procedures for some methods used in biomedical research, such as genomics (e.g., DNA sequencing, RNA-seq) or cytometry, have been introduced (e.g. ENCODE4), this issue has not been tackled for optical microscopy instrumentation and images. Although many calibration standards and protocols have been published, there is a lack of awareness and agreement on common Standards and guidelines for quality assessment and reproducibility5.
In April 2020, the QUality Assessment and REProducibility for instruments and images in Light Microscopy (QUAREP-LiMi) initiative6 was formed. This initiative comprises imaging scientists from academia and industry who share a common interest in achieving a better understanding of the performance and limitations of microscopes and improved quality control (QC) in light microscopy. The ultimate goal of the QUAREP-LiMi initiative is to establish a set of common QC standards, guidelines, metadata models7,8, and tools9,10, including detailed protocols, with the ultimate aim of improving reproducible advances in scientific research.
This White Paper 1) summarizes the major obstacles identified in the field that motivated the launch of the QUAREP-LiMi initiative; 2) identifies the urgent need to address these obstacles in a grassroots manner, through a community of Stakeholders including, researchers, imaging scientists11, bioimage analysts, bioimage informatics developers, corporate partners, Funding agencies, standards organizations, scientific publishers, and observers of such; 3) outlines the current actions of the QUAREPLiMi initiative, and 4) proposes future steps that can be taken to improve the dissemination and acceptance of the proposed guidelines to manage QC.
To summarize, the principal goal of the QUAREP-LiMi initiative is to improve the overall quality and reproducibility of light microscope image data by introducing broadly accepted standard practices and accurately captured image data metrics.
The community-driven initiative Quality Assessment and Reproducibility for Instruments & Images in Light Microscopy (QUAREP-LiMi) wants to improve reproducibility for light microscopy image data through Quality control (QC) management of instruments and images. It aims for a common set of QC guidelines for Hardware calibration and image acquisition, management and analysis.
Biofilms cause complications and high costs in both industry and medicine. Of particular interest are bacterial infections of prosthetic materials, which usually cannot be eliminated due to the high antibiotic resistance known for bacteria forming biofilms. The search for new materials and coatings with lower colonization potential and antibacterial activity is of great importance to reduce biofilm formation. However, there is no standardized procedure to examine the colonization characteristics of bacteria in the Biofilm state in situ. Here, we describe an automated epifluorescence microscopy system for the semi-quantitative analysis of three-dimensional (3D) biofilms on various surfaces. To analyze adherent bacteria, three materials (glass, steel and titanium) were incubated with bacteria in a flow chamber system. After fluorescence staining of the bacteria, automated image capturing, quantification of the bacteria, measurement of the colonized area and determination of the 3D biofilm height were carried out by using novel software.
Furthermore, the materials were examined for their surface topography using white light scanning interferometry. Titanium compared to glass showed a significantly higher number of adherent bacteria.
We argue that this was due to the higher microroughness of titanium. The colonized area was in accordance with the number of adherent bacteria and was also significantly larger on titanium coupons compared to glass. Maximum 3D biofilm height on glass coupons was significantly lower compared to the ones on steel and titanium. This novel method enables the standardized, automated investigation of the colonization with bacteria on different materials. This approach can considerably support the characterization of new material surfaces and their innovative coatings by analyzing the amount of attached Bacteria and thickness of biofilms in situ and eliminates the need of conventional cultivation.
We discuss the stability of weld residual strain under static and quasi cyclic transverse tensile loading in the elastic and elastic–plastic region. The test welds were joined with low transformation temperature weld filler materials with 10 wt% Cr and varying Ni-content from 8 to 12 wt%. Using neutron diffraction the residual lattice strain in the martensitic α'- and austenitic γ-phase in the fusion zone as well as the ferritic α-phase in the heat affected zone and base metal as induced by welding, superimposed by stepwise tensile loading and after unloading was measured. The amount of retained austenite in the fusion zone increases with increasing Ni-content, but it decreases with increasing load level due to stress induced martensite formation. In the as-welded condition the transverse macroscopic residual lattice strain was found to be in low compression in the fusion zone in each weld, while the heat affected zone was in tension. Local plastic deformation of the γ-phase as a result of yielding during tensile loading in combination with the change in phase fraction resulted in increased macroscopic compression in the fusion zone. The reduced yield strength in the heat affected zone resulted in plastic deformation and a considerable shift into compression. Comparison with the cross weld distribution of the hardness and FWHM of the neutron diffraction interference lines supported the assumption of plastic deformation of the γ- and α-phase in the fusion and heat affected zone, respectively, while the α'-phase in the fusion zone was stressed within the elastic regime only. Microstructural observations as well as measurement of the local γ-phase fraction by means of laboratory X-ray diffraction in the fusion zone strengthen these observations.
The scope of this paper is to illustrate the need for an improved quality assurance in fluorometry. For this purpose, instrumental sources of error and their influences on the reliability and comparability of fluorescence data are highlighted for frequently used photoluminescence techniques ranging from conventional macro- and microfluorometry over fluorescence microscopy and flow cytometry to microarray technology as well as in vivo fluorescence imaging. Particularly, the need for and requirements on fluorescence standards for the characterization and performance validation of fluorescence instruments, to enhance the comparability of fluorescence data, and to enable quantitative fluorescence analysis are discussed. Special emphasis is dedicated to spectral fluorescence standards and fluorescence intensity standards.
Die Verwendung von LTT-Zusatzwerkstoffen stellt einen alternativen Ansatz zu den sonst üblichen Verfahren der Schweißnahtnachbehandlung zur Schwingfestigkeitserhöhung geschweißter Stahlkonstruktionen dar. Der wesentliche Wirkmechanismus beruht auf der Beeinflussung des Eigenspannungszustands durch die niedrige Martensitstarttemperatur bereits während des Schweißens. Dadurch werden die Druckeigenspannungen aus der behinderten Volumenausdehnung infolge Phasenumwandlung voll wirksam. Weiter weist die Schweißnaht eine hohe Härte auf, die die Schwingrissbildung verzögern kann, allerdings auch zu einer niedrigen Kerbschlagarbeit führt.
Im ersten Teil dieses Beitrages werden grundlegende Untersuchungen zur schweißtechnischen Verarbeitung eines LTT-Zusatzwerkstoffes präsentiert. Dies beinhaltet zunächst die Sicherstellung der Schweißbarkeit sowie die Charakterisierung der Schweißgefüge und deren Härte mit dem Ziel, reproduzierbare Verbindungseigenschaften für die nachfolgende Schwingfestigkeitsprüfung herzustellen. Der zweite Teil des Beitrages beschäftigt sich mit den dazugehörigen Schwingfestigkeitsuntersuchungen an den Stählen S355J2 und S960Q unter Verwendung konventioneller Zusatzwerkstoffe im Vergleich zum LTT-Zusatz.
Das verwendete Schweißdetail ist eine Verbindungsschweißung am Stumpfstoß unter Variation der Schweißnahtausführung (DY-Naht und V-Naht). Weitergehend wird eine bauteilähnliche Probe (die Längssteife) untersucht, bei der der LTT-Zusatzwerkstoff als zusätzliche Schweißlage aufgebracht wurde. Neben der Schwingfestigkeit werden die Schweißnähte hinsichtlich der Eigenspannungen, der Eigenspannungsstabilität im Schwingversuch sowie metallografisch charakterisiert. Die Ergebnisse zeigen, dass LTT-Zusatzwerkstoffe unter Einhaltung wesentlicher Konstruktionsrichtlinien zu einem deutlichen Anstieg der Schwingfestigkeit führen. Dadurch kann das Leichtbaupotential hochfester Stahlgüten genutzt werden.
Welding residual stresses have an impact on the performance of welded structures, on their fracture resistance, their resistance against fatigue crack propagation and, most important, their fatigue strength and fatigue lifetime. The present paper provides an overview on the issue mainly from the point of view of the application of fracture mechanics to the determination of the fatigue strength as the topic of this Special issue. Besides own experimental and theoretical data a comprehensive discussion is provided in that context which includes the definition and interaction of short- and long-range (or reaction) residual stresses, the effect of cyclic mechanical loading and its treatment in fracture and fatigue analyses.
The use of low transformation temperature (LTT) filler materials represents a smart approach for increasing the fatigue strength of welded high strength steel structures apart from the usual procedures of post weld treatment. The main mechanism is based on the effect of the low start temperature of martensite formation on the stress already present during welding. Thus, compressive residual stress formed due to constrained volume expansion in connection with phase transformation become highly effective. Furthermore, the weld metal has a high hardness that can delay the formation of fatigue cracks but also leads to low toughness. Fundamental investigations on the weldability of an LTT filler material are presented in this work, including the characterization of the weld microstructure, its hardness, phase transformation temperature and mechanical properties. Special attention was applied to avoid imperfections in order to ensure a high weld quality for subsequent fatigue testing. Fatigue tests were conducted on the welded joints of the base materials S355J2 and S960QL using conventional filler materials as a comparison to the LTT filler. Butt joints were used with a variation in the weld type (DY-weld and V-weld). In addition, a component-like specimen (longitudinal stiffener) was investigated where the LTT filler material was applied as an additional layer. The joints were characterized with respect to residual stress, its stability during cyclic loading and microstructure. The results show that the application of LTT consumables leads to a significant increase in fatigue strength when basic design guidelines are followed. This enables a benefit from the lightweight design potential of high-strength steel grades.
Die Verwendung von LTT-Zusatzwerkstoffen stellt einen alternativen Ansatz zu den sonst üblichen Verfahren der Schweißnahtnachbehandlung zur Schwingfestigkeitserhöhung geschweißter Stahlkonstruktionen dar. Der wesentliche Wirkmechanismus beruht auf der Beeinflussung des Eigenspannungszustands durch die niedrige Martensitstarttemperatur bereits während des Schweißens. Dadurch werden die Druckeigenspannungen aus der behinderten Volumenausdehnung infolge Phasenumwandlung voll wirksam. Weiter weist die Schweißnaht eine hohe Härte auf, die die Schwingrissbildung verzögern kann, allerdings auch zu einer niedrigen Kerbschlagarbeit führt.
Im vorliegenden Forschungsvorhaben wurden grundlegende Untersuchungen zur schweißtechnischen Verarbeitung eines LTT-Zusatzwerkstoffes durchgeführt. Dies beinhaltet die Sicherstellung der Schweißbarkeit sowie die Charakterisierung der Verbindungseigenschaften.
Untersuchungen zur Schweißeignung machten deutlich, dass ein sicherer Einsatz in dem für hochfeste Stähle zur Verfügung stehenden Arbeitsfenster möglich ist. Der verwendete LTT-Zusatz auf Cr-Ni-Basis lässt sich mit hoher Nahtgüte fügen. Auch die mechanischen Eigenschaften erlauben den Einsatz im Bereich hochfester Stähle mit einer Streckgrenze von 960 MPa. Entwicklungspotential gibt es hinsichtlich der Zähigkeit. Die in dieser Arbeit erreichten Kerbschlagwerte liegen deutlich unter denen kommerziell verfügbarer konventioneller Schweißgüter. Die Untersuchungen belegen, dass der Effekt der martensitischen Phasenumwandlung im gesamten Schweißgut zum Tragen kommt. Die angestrebten hohen Druckeigenspannungen finden sich vornehmlich im Schweißgutinnern.
Im weiteren Vorgehen wurden Schwingfestigkeitsuntersuchungen an den Stählen S355J2 und S960Q unter Verwendung konventioneller Zusatzwerkstoffe im Vergleich zum LTT-Zusatz durchgeführt. Die verwendeten Konstruktionsdetails sind ein Stumpfstoß unter Variation der Schweißnahtausführung (DY-Naht und V-Naht), ein Kreuzstoß mit HV-Naht sowie ein Überlappstoß mit einseitig und beidseitig geschweißter Kehlnaht.
Weitergehend wurde eine bauteilähnliche Probe (die Längssteife) untersucht, bei der der LTT-Zusatzwerkstoff als zusätzliche Schweißlage aufgebracht wurde. Neben der Schwingfestigkeit wurden die Schweißnähte hinsichtlich der Eigenspannungen, der Eigenspannungsstabilität im Schwingversuch sowie metallografisch charakterisiert.
Eine generell positive Wirkung des LTT-Zusatzwerkstoffes im Hinblick auf die Schwingfestigkeitssteigerung kann nicht bestätigt werden. Teilweise ist eine Steigerung der Schwingfestigkeit bei Substitution konventioneller Zusatzwerkstoffe zu beobachten, teilweise zeigt sich kein Effekt. Ursächlich hierfür ist die bei manchen Stoßformen mangelnde Steifigkeit quer zur Schweißnaht, die zur Ausbildung hoher Druckeigenspannungen infolge Phasenumwandlung notwendig wäre. Die bauteilähnliche Längssteife bestätigt allerdings das grundlegende Potential der LTT-Zusatzwerkstoffe bei Vorliegen hinreichender Steifigkeit.