TY - JOUR A1 - Tscheuschner, Georg A1 - Ponader, Marco A1 - Raab, Christopher A1 - Weider, Prisca S. A1 - Hartfiel, Reni A1 - Kaufmann, Jan Ole A1 - Völzke, Jule L. A1 - Bosc-Bierne, Gaby A1 - Prinz, Carsten A1 - Schwaar, T. A1 - Andrle, Paul A1 - Bäßler, Henriette A1 - Nguyen, Khoa A1 - Zhu, Y. A1 - Mey, A. S. J. S. A1 - Mostafa, A. A1 - Bald, I. A1 - Weller, Michael G. T1 - Efficient Purification of Cowpea Chlorotic Mottle Virus by a Novel Peptide Aptamer N2 - The cowpea chlorotic mottle virus (CCMV) is a plant virus explored as a nanotechnological platform. The robust self-assembly mechanism of its capsid protein allows for drug encapsulation and targeted delivery. Additionally, the capsid nanoparticle can be used as a programmable platform to display different molecular moieties. In view of future applications, efficient production and purification of plant viruses are key steps. In established protocols, the need for ultracentrifugation is a significant limitation due to cost, difficult scalability, and safety issues. In addition, the purity of the final virus isolate often remains unclear. Here, an advanced protocol for the purification of the CCMV from infected plant tissue was developed, focusing on efficiency, economy, and final purity. The protocol involves precipitation with PEG 8000, followed by affinity extraction using a novel peptide aptamer. The efficiency of the protocol was validated using size exclusion chromatography, MALDI-TOF mass spectrometry, reversed-phase HPLC, and sandwich immunoassay. Furthermore, it was demonstrated that the final eluate of the affinity column is of exceptional purity (98.4%) determined by HPLC and detection at 220 nm. The scale-up of our proposed method seems to be straightforward, which opens the way to the large-scale production of such nanomaterials. This highly improved protocol may facilitate the use and implementation of plant viruses as nanotechnological platforms for in vitro and in vivo applications. N2 - Das Cowpea Chlorotic Mottle Virus (CCMV) ist ein Pflanzenvirus, das als nanotechnologische Plattform erforscht wird. Der robuste Selbstorganisationsmechanismus seines Kapsidproteins ermöglicht die Verkapselung und gezielte Abgabe von Medikamenten. Darüber hinaus kann das Kapsid-Nanopartikel als programmierbare Plattform für die Präsentation verschiedener molekularer Komponenten verwendet werden. Im Hinblick auf künftige Anwendungen ist eine effiziente Produktion und Reinigung von Pflanzenviren von entscheidender Bedeutung. In etablierten Protokollen stellt die notwendige Ultrazentrifugation aufgrund von Kosten, schwieriger Skalierbarkeit und Sicherheitsaspekten eine erhebliche Einschränkung dar. Darüber hinaus bleibt die Reinheit des endgültigen Virusisolats oft unklar. Hier wurde ein fortschrittliches Protokoll für die Reinigung von CCMV aus infiziertem Pflanzengewebe entwickelt, wobei der Schwerpunkt auf Effizienz, Wirtschaftlichkeit und Reinheit lag. Das Protokoll beinhaltet eine Fällung mit Polyethylenglycol (PEG 8000), gefolgt von einer Affinitätsextraktion mit einem neuartigen Peptid-Aptamer. Die Effizienz des Protokolls wurde mithilfe von Größenausschluss-Chromatographie (SEC), MALDI-TOF-Massenspektrometrie, Umkehrphasen-HPLC und Sandwich-Immunoassay validiert. Darüber hinaus wurde nachgewiesen, dass das endgültige Eluat der Affinitätssäule eine außergewöhnliche Reinheit (98,4 %) aufweist, die durch HPLC und Detektion bei 220 nm bestimmt wurde. Die Skalierung der von uns vorgeschlagenen Methode scheint einfach zu sein, was den Weg für eine größer angelegte Produktion solcher Nanomaterialien ebnet. Dieses stark verbesserte Protokoll könnte die Verwendung und Umsetzung von Pflanzenviren als nanotechnologische Plattformen für In-vitro- und In-vivo-Anwendungen erleichtern. KW - Affinity chromatography KW - Nanoparticles KW - Nanoscience KW - Carrier protein KW - Encapsulation KW - Combinatorial peptide library KW - Peptide binder KW - Vigna unguiculata KW - Augenbohne KW - Schlangenbohne KW - Pflanzenvirus KW - Plant virus KW - Upscaling KW - Commercialization KW - Reference material KW - Nanocarrier PY - 2023 U6 - http://nbn-resolving.de/urn/resolver.pl?urn:nbn:de:kobv:b43-572645 VL - 15 IS - 3 SP - 1 EP - 24 PB - MDPI CY - Basel, Schweiz AN - OPUS4-57264 LA - eng AD - Bundesanstalt fuer Materialforschung und -pruefung (BAM), Berlin, Germany ER - TY - JOUR A1 - Bierstedt, Andreas A1 - You, Yi A1 - van Wasen, Sebastian A1 - Bosc-Bierne, Gaby A1 - Weller, Michael G. A1 - Riedel, Jens T1 - Laser-Induced Microplasma as an Ambient Ionization Approach for the Mass-Spectrometric Analysis of Liquid Samples N2 - An airborne high repetition rate laser-induced plasma was applied as a versatile ambient ionization source for mass-spectrometric determinations of polar and nonpolar analytes in solution. The laser plasma was sustained between a home-built pneumatic nebulizer and the inlet capillary of an Orbitrap mass spectrometer. To maintain stable conditions in the droplet-rich spray environment, the plasma was directly fed by the fundamental output (λ = 1064 nm) of a current state-of-the-art diode-pumped solid-state laser. Ionization by the laser-driven plasma resulted in signals of intact analyte ions of several chemical categories. The analyte ions were found to be fully desolvated since no further increase in ion signal was observed upon heating of the inlet capillary. Due to the electroneutrality of the plasma, both positive and negative analyte ions could be formed simultaneously without altering the operational parameters of the ion source. While, typically, polar analytes with pronounced gas phase basicities worked best, nonpolar and amphoteric compounds were also detected. The latter were detected with lower ion signals and were prone to a certain degree of fragmentation induced during the ionization process. All the described attests the laser-induced microplasma by a good performance in terms of stability, robustness, sensitivity, and general applicability as a self-contained ion source for the liquid sample introduction. KW - Laser KW - Laser-induced plasma KW - Ambient ionization KW - Mass Spectrometry PY - 2019 U6 - https://doi.org/10.1021/acs.analchem.9b00329 SN - 0003-2700 VL - 91 IS - 9 SP - 5922 EP - 5928 PB - American Chemical Society CY - Washington, DC, USA AN - OPUS4-47939 LA - eng AD - Bundesanstalt fuer Materialforschung und -pruefung (BAM), Berlin, Germany ER -